NOD樣受體1elisa試劑盒是一種用于檢測生物樣本中NOD1蛋白表達水平的免疫學檢測工具,在感染免疫、炎癥反應和細胞信號轉導研究中具有重要應用價值。 一、??工作原理:特異性抗體識別與信號放大??
NOD樣受體1elisa試劑盒基于酶聯免疫吸附測定(ELISA)技術,通過雙抗體夾心法檢測NOD1蛋白。其核心原理是:
??1、固相抗體捕獲??:微孔板預先包被針對NOD1蛋白的特異性捕獲抗體,樣本中的NOD1蛋白與之結合形成固相復合物。
??2、檢測抗體識別??:加入生物素標記的檢測抗體,與NOD1蛋白的另一表位結合,形成"抗體-抗原-抗體"夾心結構。
3、??信號放大系統??:加入酶標記的鏈霉親和素,與生物素結合形成復合物。加入顯色底物,酶催化底物產生可測量的顏色變化,顏色深淺與樣本中NOD1濃度成正比。
4、該技術利用抗原-抗體特異性結合和酶催化信號放大,具有高靈敏度和良好的特異性。
??二、實驗方法:標準化操作流程??
??1、樣本準備??
收集細胞培養上清、血清或組織勻漿等樣本,避免反復凍融。NOD樣受體1elisa試劑盒支持直接檢測裂解液,簡化前處理步驟。
??2、加樣與孵育??
將樣本或標準品加入預包被抗體的微孔板中,室溫或4℃孵育1-2小時,使NOD1蛋白與固相抗體充分結合。
??3、洗滌與檢測抗體結合??
洗滌去除未結合物質后,加入生物素標記的檢測抗體,再次孵育使抗體與NOD1蛋白結合。
??4、信號標記與顯色??
加入酶標記的鏈霉親和素,孵育后洗滌,加入顯色底物。避光反應一定時間后終止反應。
??5、吸光度測定與數據分析??
使用酶標儀在特定波長下測定各孔吸光度值。通過標準曲線計算樣本中NOD1濃度,通常以OD值對標準品濃度作圖,建立線性回歸方程。